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PCR實驗室設計規范,安裝步驟

來源:http://m.ruihesc.com/ 作者:DEIIANG得創 發布時間:2022-12-14 08:30

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PCR實驗室設計要點說明

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PCR即聚合酶鏈式反應,是分子生物學研究和實驗的常規方法,也是生物學、醫學臨床等領域廣泛應用的實驗技術。其特點是能將微量的DNA大幅增加。PCR實驗室分為四個區域,進入各工作區域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開各工作區域時,不得將工作服帶出,四區域分別為:試劑配制區、樣品處理區、核酸擴增區、產物分析區。
PCR實驗室設計
PCR實驗室可以是分散形式,也可以是組合形式。完成一組PCR實驗,通常應經過試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產物分析四個實驗過程,若實驗工藝需要,還應增加樣品粉碎。
①分散形式PCR實驗室:所謂分散形式PCR實驗室,是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠,呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCRclass="wpcom_keyword_link"實驗室建設設計,由于各個實驗之間不易相互干擾,因此無需特殊條件要求。
②組合形式PCR實驗室:所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,組成獨立實驗區域的形式。對于組合形式PCR實驗室的建設設計,由于各個實驗間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對總體布局以及屏障系統具有一定的要求。各室在入口處設緩沖間,以減少室內外空氣交換。
在PCR實驗中所產生的DNA與RNA片段污染是一直以來PCR實驗的重點問題。此類污染主要至上次試驗中所產生的基因片段對下次試驗產生的污染,而且一旦試驗環境中的污染形成后很難處理。因為消毒等傳統方式對于基因污染沒有很良好的效果。所以在PCRclass="wpcom_keyword_link"實驗室設計中一般將整套實驗室設計為全新風型實驗室,這樣而已通過有效的換氣次數來達到凈化室內污染的作用。
而在控制方面也有很多不同之處,因為各單位對PCR實驗的重視程度各有不同,所以在設計上也有不同,主要的控制設計有定送定排式壓力控制系統、變送定排式壓力控制系統變送變排式壓力控制系統。在控制設備方面也有很多區分如壓力無關型控制系統、壓力有關型控制系統。
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PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

PCR實驗室設計必須設計走廊嗎?

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PCR實驗室又稱為基因擴增實驗室,是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。通過DNA基因追蹤系統,能迅速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別,精確檢測乙肝病毒在患者體內存在的數量、是否復制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據。
PCR實驗室設計
一、PCR實驗室基本結構
PCR實驗室基本由四大結構組成,常見為:試劑準備區、制備區、擴增區和擴增分析區。
二、基本功能介紹:
1、準備區:主要進行實驗所需試劑的準備工作,分裝等,由傳遞窗運送至制備區,嚴禁走人員通道。
2、制備區:主要進行樣品等保存,DNA/RNA的提取、貯存和其加入至擴增反應管和測定DNA/RNA的合成。
3、擴增區:主要進行DNA的擴增,已制備的DNA模版和合成的cDNA的加入和主板反應混合液制備成反應混合液等也可在擴增區內進行,在巢式PCR測定中,通常在首次擴增后必須打開反應管,因此巢式擴增有較高等污染危害性,二次加樣必須在本區完成。
4、擴增分析:主要用來做擴增產物的測定,本區是主要的擴增產物污染來源,因此必須主意避免通過本區的物品或者工作服將擴增產物帶出。
三、PCR實驗室的走廊、傳遞窗設計常識
1. PCR走廊:并不是標配,進深不夠時不要做PCR走廊,且PCR走廊會增加交叉污染。
這4個分區(試劑儲存和準備區、標本制備區、核算擴增區、產物分析區)原本就不需連接在一起。且在物理空間上必須是完全相互獨立的,各區域無論在空間上還是在使用中,應當始終處于完全的分隔狀態,不能有空氣的直接相通。
2. 傳遞窗:并非必須設置(只要不涉及潔/污分流就不需要設置傳遞窗),但一般實驗機構/實驗人員喜歡設置。
傳遞窗的本質同緩沖間,是物流的緩沖間。在PCRclass="wpcom_keyword_link"實驗室設計中,試劑準備和標本制備間是重點保護的區域,此處最好不要加傳遞窗,防止交叉污染。實驗中的污染風險主要來自于核酸擴增時的加樣行為,但由于操作在生物安全柜內進行,且確保空氣不外溢,因此不存在污染。
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PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

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此文關鍵字:PCR,實驗室,設計,規范,安裝,步驟

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