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PCR實驗室設計規(guī)范,安裝方法

來源:http://m.ruihesc.com/ 作者:DEIIANG得創(chuàng) 發(fā)布時間:2022-12-14 13:30

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PCR實驗室設計

PCR實驗室主要實驗項目:病毒檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等。
PCR實驗室建設原則上分為四個單獨的工作區(qū)域:試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。
1、試劑準備區(qū):用于試驗試劑的準備。
該區(qū)域為正壓,目的是防止污染物質(zhì)溢入。該區(qū)域內(nèi)部又可分為3個區(qū)域:普通提取試劑的準備區(qū)、PCR試劑準備區(qū)和PCR主反應液準備區(qū)。在普通提取試劑的準備區(qū)內(nèi)準備一些樣品核酸提取時所需的裂解液、提取液等;PCR試劑準備區(qū)用于PCR試劑的制備和保存。例如準備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染,避免反復冷凍和解凍,試劑存貯溶液應該被平均為小的工作體積,儲存在這個房間以備后用:PCR主反應液準備區(qū)將進行主反應混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示:不能將其它房間的材料(包括擴增、模板和目標核酸或陽性對照、供應品、或設備)帶進試劑準備區(qū)。
2、樣品準備區(qū):該區(qū)域無壓力設置要求。
該區(qū)域是用于對樣品進行分樣,將樣品進行研磨、粉碎、勻漿的區(qū)域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過程中會產(chǎn)生氣溶膠,因此,存在陽性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域與后面的區(qū)域應嚴格隔離,應放在與后面的三個區(qū)域隔開的獨立的房間中。在樣品準備區(qū)內(nèi)還可設立一個專用的封閉區(qū)或房間用于樣品的接收和儲存。這個房間可以放置冰箱用于樣品儲存,應該和樣品準備區(qū)其它區(qū)域隔離開。樣品準備區(qū)域的人員不得進入試劑準備區(qū)。
3、核酸提取區(qū):核酸提取區(qū)是進行樣品核酸提取的區(qū)域。
該區(qū)域為負壓,目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準備區(qū)又包括從樣品中進行核酸提取和純化的區(qū)域以及將核酸加到包含PCR主反應混合液管中的操作區(qū)域。添加完樣品后,PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時,陽性對照和含目標序列的樣品要與待測樣本分開操作,以避免模板添加時造成交叉污染
重要提示:這個房間里的一切物品不得帶人試劑準備區(qū)。
4、擴增和產(chǎn)品檢測區(qū):該區(qū)域是用來進行PCR擴增和PCR分析。
PER儀放置在這個區(qū)域。房間保持負壓,目的是防止核酸溢出。在該區(qū)域人員一定要一直穿戴工作服和手套,在離開房間前脫去,防止擴增子污染其它地點。所有用于擴增和產(chǎn)品檢測的設備要指定用于這個房間。PCR分析]二作也設置在該區(qū)域,例如:酶切、測序、克隆等,但實驗室應盡可能把這些活動分隔在不同區(qū)域或不同房間。以降低擴增產(chǎn)物的污染風險。如果沒有條件在該區(qū)域設立負壓,此區(qū)域必須建立排風裝置。

PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

PCR實驗室設計必須設計走廊嗎?

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PCR實驗室又稱為基因擴增實驗室,是一種分子生物學技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達納米級別,精確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據(jù)。
PCR實驗室設計
一、PCR實驗室基本結(jié)構(gòu)
PCR實驗室基本由四大結(jié)構(gòu)組成,常見為:試劑準備區(qū)、制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增分析區(qū)。
二、基本功能介紹:
1、準備區(qū):主要進行實驗所需試劑的準備工作,分裝等,由傳遞窗運送至制備區(qū),嚴禁走人員通道。
2、制備區(qū):主要進行樣品等保存,DNA/RNA的提取、貯存和其加入至擴增反應管和測定DNA/RNA的合成。
3、擴增區(qū):主要進行DNA的擴增,已制備的DNA模版和合成的cDNA的加入和主板反應混合液制備成反應混合液等也可在擴增區(qū)內(nèi)進行,在巢式PCR測定中,通常在首次擴增后必須打開反應管,因此巢式擴增有較高等污染危害性,二次加樣必須在本區(qū)完成。
4、擴增分析:主要用來做擴增產(chǎn)物的測定,本區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源,因此必須主意避免通過本區(qū)的物品或者工作服將擴增產(chǎn)物帶出。
三、PCR實驗室的走廊、傳遞窗設計常識
1. PCR走廊:并不是標配,進深不夠時不要做PCR走廊,且PCR走廊會增加交叉污染。
這4個分區(qū)(試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、核算擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū))原本就不需連接在一起。且在物理空間上必須是完全相互獨立的,各區(qū)域無論在空間上還是在使用中,應當始終處于完全的分隔狀態(tài),不能有空氣的直接相通。
2. 傳遞窗:并非必須設置(只要不涉及潔/污分流就不需要設置傳遞窗),但一般實驗機構(gòu)/實驗人員喜歡設置。
傳遞窗的本質(zhì)同緩沖間,是物流的緩沖間。在PCRclass="wpcom_keyword_link"實驗室設計中,試劑準備和標本制備間是重點保護的區(qū)域,此處最好不要加傳遞窗,防止交叉污染。實驗中的污染風險主要來自于核酸擴增時的加樣行為,但由于操作在生物安全柜內(nèi)進行,且確保空氣不外溢,因此不存在污染。
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PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

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