PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)范,管理要求.得創(chuàng)實(shí)驗(yàn)室工程公司專(zhuān)業(yè)從事PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)范,管理要求項(xiàng)目規(guī)劃，設(shè)計(jì)，施工一條龍的工程公司，歡迎來(lái)電咨詢(xún)：027-82289886

PCR實(shí)驗(yàn)室主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：病毒檢測(cè)，乙型肝炎，禽疫病，癌基因的檢測(cè)和診斷，DNA指紋，個(gè)體識(shí)別，親子鑒定及法醫(yī)物證等等。
PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
1、試劑準(zhǔn)備區(qū)：用于試驗(yàn)試劑的準(zhǔn)備。
該區(qū)域?yàn)檎龎海康氖欠乐刮廴疚镔|(zhì)溢入。該區(qū)域內(nèi)部又可分為3個(gè)區(qū)域：普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)、PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)和PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)。在普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)準(zhǔn)備一些樣品核酸提取時(shí)所需的裂解液、提取液等；PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)用于PCR試劑的制備和保存。例如準(zhǔn)備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染，避免反復(fù)冷凍和解凍，試劑存貯溶液應(yīng)該被平均為小的工作體積，儲(chǔ)存在這個(gè)房間以備后用：PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)將進(jìn)行主反應(yīng)混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示：不能將其它房間的材料(包括擴(kuò)增、模板和目標(biāo)核酸或陽(yáng)性對(duì)照、供應(yīng)品、或設(shè)備)帶進(jìn)試劑準(zhǔn)備區(qū)。
2、樣品準(zhǔn)備區(qū)：該區(qū)域無(wú)壓力設(shè)置要求。
該區(qū)域是用于對(duì)樣品進(jìn)行分樣，將樣品進(jìn)行研磨、粉碎、勻漿的區(qū)域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，因此，存在陽(yáng)性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域與后面的區(qū)域應(yīng)嚴(yán)格隔離，應(yīng)放在與后面的三個(gè)區(qū)域隔開(kāi)的獨(dú)立的房間中。在樣品準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)還可設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的封閉區(qū)或房間用于樣品的接收和儲(chǔ)存。這個(gè)房間可以放置冰箱用于樣品儲(chǔ)存，應(yīng)該和樣品準(zhǔn)備區(qū)其它區(qū)域隔離開(kāi)。樣品準(zhǔn)備區(qū)域的人員不得進(jìn)入試劑準(zhǔn)備區(qū)。
3、核酸提取區(qū)：核酸提取區(qū)是進(jìn)行樣品核酸提取的區(qū)域。
該區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準(zhǔn)備區(qū)又包括從樣品中進(jìn)行核酸提取和純化的區(qū)域以及將核酸加到包含PCR主反應(yīng)混合液管中的操作區(qū)域。添加完樣品后，PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照和含目標(biāo)序列的樣品要與待測(cè)樣本分開(kāi)操作，以避免模板添加時(shí)造成交叉污染
重要提示：這個(gè)房間里的一切物品不得帶人試劑準(zhǔn)備區(qū)。
4、擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測(cè)區(qū)：該區(qū)域是用來(lái)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和PCR分析。
PER儀放置在這個(gè)區(qū)域。房間保持負(fù)壓，目的是防止核酸溢出。在該區(qū)域人員一定要一直穿戴工作服和手套，在離開(kāi)房間前脫去，防止擴(kuò)增子污染其它地點(diǎn)。所有用于擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測(cè)的設(shè)備要指定用于這個(gè)房間。PCR分析]二作也設(shè)置在該區(qū)域，例如：酶切、測(cè)序、克隆等，但實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能把這些活動(dòng)分隔在不同區(qū)域或不同房間。以降低擴(kuò)增產(chǎn)物的污染風(fēng)險(xiǎn)。如果沒(méi)有條件在該區(qū)域設(shè)立負(fù)壓，此區(qū)域必須建立排風(fēng)裝置。

PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱(chēng)。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米級(jí)別。
當(dāng)前，PCR實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于醫(yī)院及各疾病預(yù)防控制中心的疫病檢驗(yàn)，2010年，衛(wèi)生部辦公廳制定并發(fā)布了《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》以及《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》（以下簡(jiǎn)稱(chēng)導(dǎo)則）。導(dǎo)則規(guī)定了PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的基本原則，原則上PCR實(shí)驗(yàn)室需設(shè)置4個(gè)區(qū)域∶試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)，各個(gè)分區(qū)具體設(shè)備配置也各有不同。
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的4個(gè)區(qū)域主要設(shè)備配置：
試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：冷凍冷藏冰箱、超凈工作臺(tái)、臺(tái)式離心機(jī)、掌上離心機(jī)、微孔板離心機(jī)、可移動(dòng)紫外燈、混勻器、田平、微量加樣器等；
標(biāo)本制備區(qū)：2～8℃冰箱、低溫冰箱或超低溫冰箱、生物安全柜、高速離心機(jī)、均質(zhì)儀、核酸提取儀、蒸汽滅菌器、超微量紫外分光光度計(jì)、過(guò)氧化氫消毒劑、金屬浴、水浴箱等；
擴(kuò)增區(qū)：普通PCR儀、熒光定量PCR儀、數(shù)字PCR儀、質(zhì)譜儀、微量加樣器、低溫冰箱、可移動(dòng)紫外燈等；
產(chǎn)物分析區(qū)：凝膠成像系統(tǒng)、電泳系統(tǒng)、微量加樣器、可移動(dòng)紫外燈等。
PCR實(shí)驗(yàn)室四個(gè)區(qū)域要求：空氣不能直接相通
根據(jù)導(dǎo)則要求，PCR 實(shí)驗(yàn)室各個(gè)區(qū)域無(wú)論在空間上還是使用中必須完全獨(dú)立，不能有任何空氣的直接相通。空氣流向可按照：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)——標(biāo)本制備區(qū)——擴(kuò)增區(qū)——產(chǎn)物分析區(qū)壓力遞減的方式進(jìn)行，防止各區(qū)域空氣的交叉污染。
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)核心：各區(qū)域壓力梯度控制
PCR 反應(yīng)的最大特點(diǎn)就是極高的靈敏性，極其微量的污染就會(huì)造成 PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的假陽(yáng)性，因此組合型 PCR 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題就是避免交叉污染，而組合型 PCR 實(shí)驗(yàn)室的平面布局模式及各區(qū)域的壓力梯度控制成為了解決這一核心問(wèn)題的關(guān)鍵。
PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)系統(tǒng)：嚴(yán)格控制送排風(fēng)比例
現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《疾病預(yù)防控制中心建筑技術(shù)規(guī)范》GB 50881 對(duì) PCR 實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)設(shè)計(jì)參數(shù)進(jìn)行了規(guī)范與要求，PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域并沒(méi)有凈化控制要求，但為了避免交叉感染，通常采用全送全排的直流空調(diào)系統(tǒng)，并且需要嚴(yán)格控制好送風(fēng)、排風(fēng)的比例，保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)域的壓力梯度。
PCR實(shí)驗(yàn)室暖通：獨(dú)立的全新風(fēng)
組合型PCR實(shí)驗(yàn)室的空調(diào)負(fù)荷、換氣次數(shù)等要求與二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室原則一致。PCR實(shí)驗(yàn)室的暖通空調(diào)系統(tǒng)需設(shè)置獨(dú)立的一套全新風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)，PCR實(shí)驗(yàn)室并無(wú)空氣凈化的強(qiáng)制性要求，因此只需要設(shè)置初效加中效過(guò)濾器即可，不同房間的排風(fēng)宜設(shè)置止回裝置，排風(fēng)機(jī)吸入側(cè)設(shè)置活性炭等生物凈化裝置。
PCR緩沖間：雙向保護(hù)屏障
組合型 PCR 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置緩沖間，緩沖間在實(shí)驗(yàn)核心區(qū)與專(zhuān)用走廊區(qū)域形成一道雙向保護(hù)屏障，既阻止外部環(huán)境的潛在污染物質(zhì)如氣溶膠等進(jìn)入實(shí)驗(yàn)核心區(qū)，同時(shí)又控制核心實(shí)驗(yàn)（產(chǎn)物分析）的有害物質(zhì)滲入環(huán)境，對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)外部環(huán)境及內(nèi)部試劑均起到了保護(hù)作用。
本文節(jié)選自《二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建造與運(yùn)行管理指南》

臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)如何管理？臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)如何管理？
臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室由衛(wèi)生部管理，依據(jù)國(guó)家衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào)）、《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》（衛(wèi)檢字[2002]8號(hào)）、《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》（2002-1-14）、《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室申請(qǐng)表》及《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收表》執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)室申辦程序包括：
（1）填寫(xiě)調(diào)查表，由省臨檢中心審核；
（2）正式填寫(xiě)申請(qǐng)表，上報(bào)衛(wèi)生部臨檢中心；
（3）評(píng)審由衛(wèi)生部、省專(zhuān)家參加，并報(bào)省衛(wèi)生廳備案；
（4）合格單位名單由衛(wèi)生行政部門(mén)在媒體公示。臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備以下條件：標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)設(shè)置、專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員、標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）和質(zhì)量管理文件等。
1、實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及人員管理在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)上，建立單流向、一體化的臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室是安全準(zhǔn)確進(jìn)行基因擴(kuò)增檢驗(yàn)和保障生物安全的重要措施。其具有理想的布局結(jié)構(gòu)、標(biāo)準(zhǔn)的風(fēng)向設(shè)置、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆雷o(hù)措施、簡(jiǎn)明潔凈的外觀、合適的環(huán)境條件與參數(shù)等。它具體包括建設(shè)好“3個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)”（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)及其各自緩沖區(qū)）和“3個(gè)系統(tǒng)”（單向氣流控制系統(tǒng)、單向物品傳送系統(tǒng)、生物安全控制系統(tǒng)）。對(duì)于人員管理，首先應(yīng)制定一系列規(guī)章制度。檢驗(yàn)人員要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，制定日常工作中的質(zhì)量控制流程，嚴(yán)格執(zhí)行查對(duì)制度和考核制度，具有實(shí)事求是的工作作風(fēng)。檢驗(yàn)人員必須滿足以下條件：
（1）經(jīng)有資質(zhì)的單位培訓(xùn)，考試合格取得上崗證后持證上崗。
（2）專(zhuān)業(yè)主管為本科以上學(xué)歷和中級(jí)以上職稱(chēng)3a以上工作經(jīng)歷。
（3）工作人員須有專(zhuān)業(yè)技術(shù)職稱(chēng)。
（4）培訓(xùn)單位須由省衛(wèi)生廳指定，經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)可。
2、實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程的規(guī)范化建立符合當(dāng)今實(shí)驗(yàn)室的管理模式，形成管理文件，包括質(zhì)量手冊(cè)、質(zhì)量體系程序文件和標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）等。質(zhì)量手冊(cè)主要包括目錄、批準(zhǔn)頁(yè)、前言、質(zhì)量方針、組織結(jié)構(gòu)、人員管理、實(shí)驗(yàn)室設(shè)施環(huán)境、儀器設(shè)備、生物防護(hù)措施、標(biāo)準(zhǔn)操作程序、標(biāo)本管理、記錄、報(bào)告、應(yīng)急處理及實(shí)驗(yàn)室的工作制度等。SOP文件是最具體、最具可操作性，也是使用頻率最高的文件，其精髓就是使所有與實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量有關(guān)的環(huán)節(jié)都有章可循，要讓每一個(gè)操作人員都了解并嚴(yán)格遵照?qǐng)?zhí)行管理制度和標(biāo)準(zhǔn)操作程序。此外，所有實(shí)驗(yàn)的原始資料均應(yīng)存檔；所有的記錄均應(yīng)規(guī)范登記在冊(cè)；原始登記表應(yīng)記錄試劑來(lái)源、批號(hào)，質(zhì)控血清的來(lái)源及測(cè)定值，并注明是否在控；檢驗(yàn)者及審核者應(yīng)簽名。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床診斷有決定意義，其樣本應(yīng)留存，至少要與病歷的保存期一致。規(guī)范化的管理和操作保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，而且便于各項(xiàng)數(shù)據(jù)資料的核實(shí)。

臨床定量PCR的實(shí)驗(yàn)室管理方法
臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室由衛(wèi)生部根據(jù)衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床基因擴(kuò)增和檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法（武威發(fā)[2002] 10號(hào)）和工作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行管理。成都實(shí)驗(yàn)室裝修公司高效安全的手術(shù)室空氣凈化系統(tǒng)，保證手術(shù)室的無(wú)菌環(huán)境，可以滿足器官移植、心臟、血管、人工關(guān)節(jié)置換等手術(shù)所需的高度無(wú)菌環(huán)境。采用高效低毒消毒劑，以及合理使用，是保障一般手術(shù)室無(wú)菌環(huán)境的有力措施。成都手術(shù)室裝修公司采用空氣潔凈技術(shù)對(duì)微生物污染采取程度不同的控制，達(dá)到控制空間環(huán)境中空氣潔凈度適于各類(lèi)手術(shù)之要求；并提供適宜的溫、濕度，創(chuàng)造一個(gè)潔凈舒適的手術(shù)空間環(huán)境。由于手術(shù)室要嚴(yán)格控制低細(xì)菌數(shù)及低麻醉氣體濃度，所以層流超凈裝置的穩(wěn)定性是層流凈化手術(shù)室的重要驗(yàn)收指標(biāo)。成都手術(shù)室凈化公司確保手術(shù)臺(tái)潔凈度達(dá)標(biāo)，一般多采用垂直層流式效果較好　層流手術(shù)室是一個(gè)"正壓"環(huán)境，其空氣壓力根據(jù)其不同區(qū)域（如手術(shù)間、無(wú)菌準(zhǔn)備間、刷手間、麻醉間和周?chē)蓛魠^(qū)域等）潔凈度不同要求而不同。臨床基因擴(kuò)增和檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。 （魏子子[2002] 8號(hào)），“臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)”（2002-1-14），“臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用表”和“臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收”表“實(shí)施。實(shí)驗(yàn)室招標(biāo)過(guò)程包括：
1、填寫(xiě)調(diào)查表，經(jīng)省檢驗(yàn)中心審核；
2、正式填寫(xiě)申請(qǐng)表并報(bào)告衛(wèi)生部檢察院;
3、由衛(wèi)生部、省專(zhuān)家參加，并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)備案；
4、合格單位名單由衛(wèi)生行政部門(mén)在媒體上公布。臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備以下條件：標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)設(shè)置、專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和質(zhì)量管理文件。
5.實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和人員管理在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)中，建立單流，綜合臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室是安全，準(zhǔn)確的基因擴(kuò)增檢測(cè)和生物安全保護(hù)的重要措施。它具有理想的布局結(jié)構(gòu)，標(biāo)準(zhǔn)的風(fēng)向設(shè)置，嚴(yán)格的保護(hù)措施，簡(jiǎn)潔的外觀，適合的環(huán)境條件和參數(shù)。它具體包括“三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)”（試劑準(zhǔn)備區(qū)，標(biāo)本制備區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)及其各自的緩沖區(qū)）和“三個(gè)系統(tǒng)”（單向氣流控制系統(tǒng)，單向物品輸送系統(tǒng)，生物安全）的構(gòu)建控制系統(tǒng)）。對(duì)于人事管理，首先應(yīng)建立一系列規(guī)章制度。檢查人員必須嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，制定日常工作中的質(zhì)量控制程序，嚴(yán)格執(zhí)行檢查制度和考核制度，具有實(shí)事求是的工作作風(fēng)。檢查員必須滿足以下條件：
(1)由合格單位培訓(xùn)，通過(guò)考試后持有證書(shū)的崗位。
(2)專(zhuān)業(yè)主管具有學(xué)士以上學(xué)歷，三年以上中級(jí)以上工作經(jīng)驗(yàn)。
(3)工作人員必須具有專(zhuān)業(yè)技術(shù)職稱(chēng)。
(4)培訓(xùn)單位由省衛(wèi)生廳指定，經(jīng)衛(wèi)生部檢察院批準(zhǔn)。
6、實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程的規(guī)范化建立符合當(dāng)今實(shí)驗(yàn)室的管理模式，形成管理文件，包括質(zhì)量手冊(cè)、質(zhì)量體系程序文件和標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）等。質(zhì)量手冊(cè)主要包括目錄、批準(zhǔn)頁(yè)、前言、質(zhì)量方針、組織結(jié)構(gòu)、人員管理、實(shí)驗(yàn)室設(shè)施環(huán)境、儀器設(shè)備、生物防護(hù)措施、標(biāo)準(zhǔn)操作程序、標(biāo)本管理、記錄、報(bào)告、應(yīng)急處理及實(shí)驗(yàn)室的工作制度等。SOP文件是最具體、最具可操作性，也是使用頻率最高的文件，其精髓就是使所有與實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量有關(guān)的環(huán)節(jié)都有章可循，要讓每一個(gè)操作人員都了解并嚴(yán)格遵照?qǐng)?zhí)行管理制度和標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

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