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PCR實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)設(shè)計(jì),維護(hù)保養(yǎng)

來源:http://m.ruihesc.com/ 作者:DEIIANG得創(chuàng) 發(fā)布時(shí)間:2022-12-15 14:30

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PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

PCR實(shí)驗(yàn)室主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目:病毒檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個(gè)體識(shí)別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等。
PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域:試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
1、試劑準(zhǔn)備區(qū):用于試驗(yàn)試劑的準(zhǔn)備。
該區(qū)域?yàn)檎龎海康氖欠乐刮廴疚镔|(zhì)溢入。該區(qū)域內(nèi)部又可分為3個(gè)區(qū)域:普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)、PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)和PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)。在普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)準(zhǔn)備一些樣品核酸提取時(shí)所需的裂解液、提取液等;PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)用于PCR試劑的制備和保存。例如準(zhǔn)備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染,避免反復(fù)冷凍和解凍,試劑存貯溶液應(yīng)該被平均為小的工作體積,儲(chǔ)存在這個(gè)房間以備后用:PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)將進(jìn)行主反應(yīng)混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示:不能將其它房間的材料(包括擴(kuò)增、模板和目標(biāo)核酸或陽性對(duì)照、供應(yīng)品、或設(shè)備)帶進(jìn)試劑準(zhǔn)備區(qū)。
2、樣品準(zhǔn)備區(qū):該區(qū)域無壓力設(shè)置要求。
該區(qū)域是用于對(duì)樣品進(jìn)行分樣,將樣品進(jìn)行研磨、粉碎、勻漿的區(qū)域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過程中會(huì)產(chǎn)生氣溶膠,因此,存在陽性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域與后面的區(qū)域應(yīng)嚴(yán)格隔離,應(yīng)放在與后面的三個(gè)區(qū)域隔開的獨(dú)立的房間中。在樣品準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)還可設(shè)立一個(gè)專用的封閉區(qū)或房間用于樣品的接收和儲(chǔ)存。這個(gè)房間可以放置冰箱用于樣品儲(chǔ)存,應(yīng)該和樣品準(zhǔn)備區(qū)其它區(qū)域隔離開。樣品準(zhǔn)備區(qū)域的人員不得進(jìn)入試劑準(zhǔn)備區(qū)。
3、核酸提取區(qū):核酸提取區(qū)是進(jìn)行樣品核酸提取的區(qū)域。
該區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準(zhǔn)備區(qū)又包括從樣品中進(jìn)行核酸提取和純化的區(qū)域以及將核酸加到包含PCR主反應(yīng)混合液管中的操作區(qū)域。添加完樣品后,PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時(shí),陽性對(duì)照和含目標(biāo)序列的樣品要與待測樣本分開操作,以避免模板添加時(shí)造成交叉污染
重要提示:這個(gè)房間里的一切物品不得帶人試劑準(zhǔn)備區(qū)。
4、擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測區(qū):該區(qū)域是用來進(jìn)行PCR擴(kuò)增和PCR分析。
PER儀放置在這個(gè)區(qū)域。房間保持負(fù)壓,目的是防止核酸溢出。在該區(qū)域人員一定要一直穿戴工作服和手套,在離開房間前脫去,防止擴(kuò)增子污染其它地點(diǎn)。所有用于擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測的設(shè)備要指定用于這個(gè)房間。PCR分析]二作也設(shè)置在該區(qū)域,例如:酶切、測序、克隆等,但實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能把這些活動(dòng)分隔在不同區(qū)域或不同房間。以降低擴(kuò)增產(chǎn)物的污染風(fēng)險(xiǎn)。如果沒有條件在該區(qū)域設(shè)立負(fù)壓,此區(qū)域必須建立排風(fēng)裝置。

PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)效果圖 PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)效果圖
   

PCR實(shí)驗(yàn)室在設(shè)計(jì)中應(yīng)該注重什么呢?

實(shí)驗(yàn)室可分為兩大功能工作區(qū):核酸擴(kuò)增前區(qū)和核酸擴(kuò)增后區(qū)。
核酸擴(kuò)增前區(qū)域包括試劑制備室和樣品制備室。兩個(gè)房間各自獨(dú)立,沒有任何空氣互通。兩個(gè)房間相對(duì)于外部空氣壓力處于正壓狀態(tài)。核酸擴(kuò)增后區(qū)域包括擴(kuò)增區(qū) 域和產(chǎn)物分析區(qū)域,其可以使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀器、 HIV病毒載量測定器的PCR實(shí)驗(yàn)室組合成一個(gè)房間。如果該區(qū)域分為兩個(gè)房間,則兩個(gè)房間也必須各自獨(dú)立,不 能有空中互通。后擴(kuò)增區(qū)對(duì)外部空氣壓力處負(fù)壓狀態(tài)。
實(shí)驗(yàn)室根據(jù)儀器的功能設(shè)置各種工作區(qū)域。例如,使用聚合酶聯(lián)反應(yīng):設(shè)置試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)域、標(biāo)本制備區(qū)域、擴(kuò)增區(qū)域、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)域四個(gè)獨(dú)立的工作 區(qū)域,這是最常用的分區(qū)方法。如果需要粉碎樣品,則需要添加樣品破碎區(qū);如果使用實(shí)時(shí)熒光PCR法:基因擴(kuò)增區(qū)域、基因產(chǎn)物分析區(qū)域可以組合在一個(gè)房間;采用 標(biāo)本處理、核酸提取和擴(kuò)增檢測為一體的自動(dòng)PCR分析儀,則樣品制備區(qū)域、擴(kuò)增區(qū)域、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)域可以組合成一個(gè)區(qū)域,因此PCR實(shí)驗(yàn)室原則上設(shè)置五個(gè)區(qū) 域或四個(gè)區(qū)域或三個(gè)區(qū)域或兩個(gè)獨(dú)立的工作區(qū)域。
實(shí)驗(yàn)室設(shè)備是保障工作質(zhì)量不可或缺的配置。在PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)中,應(yīng)根據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的要求提供不同的儀器和設(shè)備,如:離心機(jī)、生物安全柜、超潔凈工作臺(tái)、電泳(插槽)、電轉(zhuǎn)儀、雜交箱、水浴箱、 DNA測序儀、酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等等。
實(shí)驗(yàn)室作為一種分子生物學(xué)技術(shù),可以放大DNA片段,利用DNA基因跟蹤系統(tǒng)更快,更準(zhǔn)確地檢測人體內(nèi)的病毒含量。它為醫(yī)學(xué)治療提供可靠依據(jù),為人們帶來了先進(jìn)的、快速的、高效的醫(yī)療依據(jù)。

PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)效果圖 PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)效果圖
   

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