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第三方檢測PCR實驗室分區(qū)設(shè)計

來源:/ 作者:DEIIANG得創(chuàng) 發(fā)布時間:2022-06-25 21:58

第三方檢測PCR實驗室分區(qū)設(shè)計.得創(chuàng)實驗室工程專業(yè)從事PCR實驗室工程規(guī)劃,設(shè)計,施工一條路凈化工程公司,歡迎來電咨詢:027-82289886
我們之前碰到過一些客戶,說做PCR實驗總是出現(xiàn)假陽性,明明沒有加模板最后卻擴出了產(chǎn)物。如果這種現(xiàn)象頻頻出現(xiàn),就要注意一下操作環(huán)境了。如果你去百度上搜索“PCR出現(xiàn)假陽性了怎么辦”,下面給出的建議一定會有防止交叉污染這條建議。有人說模板DNA是大分子,溶于去離子水中,怎么會無緣無故跑出來污染環(huán)境呢?小編將會一一解釋。

一.PCR實驗室空調(diào)通風系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制

PCR實驗室空調(diào)通風系統(tǒng)設(shè)計
PCR實驗室沒有嚴格的凈化要求,但為了避免各實驗區(qū)之間交叉污染的可能性,應(yīng)采用全送全排的氣流組織形式。同時,應(yīng)嚴格控制輸送和排氣的比例,以確保每個試驗區(qū)的壓力要求。 1.試劑儲存和準備區(qū)
實驗區(qū)的主要操作是儲存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合物的制備。用于標本生產(chǎn)的試劑和材料應(yīng)直接運輸?shù)皆搮^(qū)域,不得通過其他區(qū)域.試劑原料必須儲存在該地區(qū),并在該地區(qū)制備所需的儲存試劑。
對個區(qū)域?qū)饬鲏毫Φ目刂茮]有嚴格的要求。
2、標本制備區(qū)
該地區(qū)的主要操作是保存臨床標本和核酸(RNA、DNA)提取、存儲和添加到擴增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成。
該區(qū)域的壓力梯度要求為:相對于相鄰區(qū)域的正壓,以避免從相鄰區(qū)域進入該區(qū)域的氣溶膠污染。此外,由于在樣品添加過程中可能會發(fā)生氣溶膠污染,因此應(yīng)避免在該區(qū)域不必要的行走.
3.擴大反應(yīng)混合物的制備和擴大區(qū)域
該區(qū)域的主要操作是DNA或 cDNA擴大。此外,已制備的DNA合成的模板cDNA(來自樣品制備區(qū)) 添加和主反應(yīng)混合物(來自試劑儲存和制備區(qū)) 反應(yīng)混合物的制備也可在本區(qū)進行。PCR在測量中,反應(yīng)管通常必須在第一輪擴張后打開。因此,巢式擴張具有很高的污染風險,必須在該地區(qū)進行第二次樣品添加.
該區(qū)域的壓力梯度要求為:相對于相鄰區(qū)域的負壓,以避免氣溶膠從該區(qū)域泄漏。為了避免氣溶膠造成的污染,應(yīng)盡量減少在該地區(qū)不必要的行走.個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺進行。
4、擴大產(chǎn)品分析區(qū)域
該區(qū)域的主要操作是測量擴增片段。如果使用全自動封閉分析儀器進行檢測,則該區(qū)域不能設(shè)置.
該地區(qū)是擴增產(chǎn)物污染的主要來源,因此該地區(qū)的壓力梯度要求為:相對于相鄰區(qū)域的負壓,以避免擴增產(chǎn)物從該地區(qū)擴散到其他地區(qū).

PCR實驗室效果圖 PCR實驗室效果圖
   

二.PCR實驗室區(qū)域設(shè)計

PCR實驗室區(qū)域設(shè)計
(1)合理設(shè)置各實驗區(qū)域;
(2)每個實驗區(qū)域應(yīng)有明顯的標記(如醒目的門板或不同的地面顏色等),避免不同實驗區(qū)域的設(shè)備物品、試劑等混淆。
2、系統(tǒng)設(shè)置合理
(1)空調(diào)通風系統(tǒng)設(shè)置合理,盡量采用全送全排空調(diào)系統(tǒng);
(2)嚴格控制氣流壓力,確保不同實驗區(qū)域的不同壓力要求。

PCR實驗室效果圖 PCR實驗室效果圖
   

三.PCR實驗室設(shè)計布局

PCR實驗室布局
   PCR原則上,擴增檢測實驗室分為試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物制備和擴增區(qū)和擴增產(chǎn)品分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)。為了避免交叉污染,進入每個工作區(qū)域必須嚴格遵循一個方向,即只能從試劑儲存和準備區(qū)域進行→標本制備區(qū)→反應(yīng)混合物的制備和擴大區(qū)域→擴大產(chǎn)品分析區(qū)域。試驗區(qū)之間的試劑和樣品傳輸應(yīng)通過傳輸窗口進行。

PCR實驗室效果圖 PCR實驗室效果圖
   

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