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PCR實驗室如何設計,安裝步驟

來源:http://m.ruihesc.com/ 作者:DEIIANG得創 發布時間:2022-12-05 11:30

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PCR實驗室凈化系統設計要求

PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。通過DNA基因追蹤系統,能迅速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別。
當前,PCR實驗室廣泛應用于醫院及各疾病預防控制中心的疫病檢驗,2010年,衛生部辦公廳制定并發布了《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》以及《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》(以下簡稱導則)。導則規定了PCR實驗室設計的基本原則,原則上PCR實驗室需設置4個區域∶試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、產物分析區,各個分區具體設備配置也各有不同。
PCR實驗室設置的4個區域主要設備配置:
試劑儲存和準備區:冷凍冷藏冰箱、超凈工作臺、臺式離心機、掌上離心機、微孔板離心機、可移動紫外燈、混勻器、田平、微量加樣器等;
標本制備區:2~8℃冰箱、低溫冰箱或超低溫冰箱、生物安全柜、高速離心機、均質儀、核酸提取儀、蒸汽滅菌器、超微量紫外分光光度計、過氧化氫消毒劑、金屬浴、水浴箱等;
擴增區:普通PCR儀、熒光定量PCR儀、數字PCR儀、質譜儀、微量加樣器、低溫冰箱、可移動紫外燈等;
產物分析區:凝膠成像系統、電泳系統、微量加樣器、可移動紫外燈等。
PCR實驗室四個區域要求:空氣不能直接相通
根據導則要求,PCR 實驗室各個區域無論在空間上還是使用中必須完全獨立,不能有任何空氣的直接相通。空氣流向可按照:試劑儲存和準備區——標本制備區——擴增區——產物分析區壓力遞減的方式進行,防止各區域空氣的交叉污染。
PCR實驗室設計核心:各區域壓力梯度控制
PCR 反應的最大特點就是極高的靈敏性,極其微量的污染就會造成 PCR 實驗結果的假陽性,因此組合型 PCR 實驗室設計的核心問題就是避免交叉污染,而組合型 PCR 實驗室的平面布局模式及各區域的壓力梯度控制成為了解決這一核心問題的關鍵。
PCR實驗室空調系統:嚴格控制送排風比例
現行國家標準《疾病預防控制中心建筑技術規范》GB 50881 對 PCR 實驗室的各項設計參數進行了規范與要求,PCR實驗室各區域并沒有凈化控制要求,但為了避免交叉感染,通常采用全送全排的直流空調系統,并且需要嚴格控制好送風、排風的比例,保證各實驗區域的壓力梯度。
PCR實驗室暖通:獨立的全新風
組合型PCR實驗室的空調負荷、換氣次數等要求與二級生物安全實驗室原則一致。PCR實驗室的暖通空調系統需設置獨立的一套全新風空調系統,PCR實驗室并無空氣凈化的強制性要求,因此只需要設置初效加中效過濾器即可,不同房間的排風宜設置止回裝置,排風機吸入側設置活性炭等生物凈化裝置。
PCR緩沖間:雙向保護屏障
組合型 PCR 實驗室應設置緩沖間,緩沖間在實驗核心區與專用走廊區域形成一道雙向保護屏障,既阻止外部環境的潛在污染物質如氣溶膠等進入實驗核心區,同時又控制核心實驗(產物分析)的有害物質滲入環境,對實驗區外部環境及內部試劑均起到了保護作用。
本文節選自《二級生物安全實驗室設計建造與運行管理指南》

PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

PCR實驗室設計的差壓設定

PCR實驗室
來把DNA片段擴增到百萬倍以上,來達到實驗的技術要求。
PCR實驗室設計中一般分為試劑配制區、樣品處理區、核酸擴增區、產物分析區4個獨立的功能區。考慮到試劑配制、樣品處理的污染性,為了避免出現污染,實驗室的壓差梯度為:試劑配制>樣品處理>擴增>產物分析,考慮到實驗室的工作內容,可以把試劑配制區、樣品處理區定為微正壓區,核酸擴增區、產物分析區定為微負壓區。這樣就保證各個區域之間具備單向的實驗工藝、物、人與氣,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果。
常見的區域壓力有哪些設定方式呢?
第一:所有的緩沖間相對于區域房間內外,自身都是正壓狀態,例如實驗室走廊設定10Pa,緩沖間為15Pa,試劑配制到產物分析依次可分別設定為10Pa、5Pa、-5Pa、-10Pa,整個緩沖間的空氣流向都是自內向外吹,這樣既能保證主實驗區的壓力梯度,又能有效避免實驗室走廊和各實驗區的交叉氣流污染;
第二:所有緩沖間相對于區域房間內外,自身都是負壓狀態,例如實驗室走廊還設定10Pa,緩沖間為-15Pa,試劑配制到產物分析依次可分別設定為10Pa、5Pa、-5Pa、-10Pa,整個緩沖間的空氣流向都是自外向內吹,這樣也能保證主實驗區的壓力梯度,又能有效避免實驗室走廊和各實驗區的交叉氣流污染;
第三:緩沖間與實驗區保持一致的壓力梯度,例如試劑配制到產物分析如果依次分別設定為10Pa、5Pa、-5Pa、-10Pa,那么相應的緩沖間則應分別設定為:15Pa、10Pa、5Pa、-5Pa,這樣根據風的壓力流向,實驗室的前區和后區也不會做到相互污染。
無論緩沖間采用哪種壓力設定,只要是能達到有效隔離實驗室內外交互污染,就是起到了緩沖間作用,另外緩沖間一般建議采用互鎖系統,這樣能更有效地阻止氣流組織的相互混流。

PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

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此文關鍵字:PCR,實驗室,如何設計,安裝,步驟

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