潔凈室（無菌室）的使用和管理

潔凈室(無菌室)是微生物檢測的重要場所和最基本的設(shè)施，是微生物檢測質(zhì)量保證的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。潔凈室(無菌室)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GMP潔凈度標(biāo)準(zhǔn)。

因此，潔凈室設(shè)計必須按照國家標(biāo)準(zhǔn)《潔凈現(xiàn)場設(shè)計規(guī)范》、國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)行的《藥品檢驗所實驗室質(zhì)量管理規(guī)范(試行)》第18條規(guī)定執(zhí)行。

微生物實驗室潔凈室的施工、設(shè)置、檢查應(yīng)按照國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)潔凈室的施工和檢查規(guī)范進(jìn)行。對于微生物檢測工作者和使用管理者來說，更多的工作是正常管理到日常使用。

潔凈室(無菌室)的使用管理應(yīng)實現(xiàn)以下工作:

1.潔凈室(無菌室)應(yīng)符合規(guī)范要求

無菌實驗室裝修應(yīng)采光良好，避免潮濕，遠(yuǎn)廁所和污染區(qū)域。面積一般在10m2以下，在5m2以上的高度在2.4m以下。

由1~2個緩沖間、操作間構(gòu)成(操作間和緩沖間的門不能直接對應(yīng))，操作間和緩沖間應(yīng)具有滅菌功能的樣品傳遞箱。

緩沖室內(nèi)應(yīng)有洗臉盆、毛巾、無菌褲的放置架和掛鉤、拖鞋等，不得放置培養(yǎng)箱和其他垃圾的無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整，耐清洗消毒。墻壁和地板、天花板的連接處應(yīng)呈凹弧形，無間隙，無死角。

操作期間不得安裝下水道。無菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區(qū)潔凈度為100級放置同等級超凈工作臺，室內(nèi)溫度控制18-26℃，相對濕度45%-65%。

緩沖室和操作室應(yīng)設(shè)置能夠達(dá)到空氣消毒效果的紫外線燈和其他適當(dāng)?shù)南狙b置，空氣清潔水平不同的相鄰房間的靜壓差應(yīng)大于5Pa，清潔室(區(qū))和室外大氣的靜壓差應(yīng)大于10Pa。

無菌室內(nèi)照明燈嵌在天花板上，室內(nèi)照明均勻分布，照明度在300lx以上。緩沖間和操作間設(shè)置的紫外線殺菌燈(2-2.5w/m3)應(yīng)定期檢查放射強(qiáng)度，要求操作面達(dá)到40uw/m2。不符合要求的紫外殺菌燈應(yīng)及時更換。

2.建立注冊制度

可在注冊簿上設(shè)置日期、時間、使用者、設(shè)備運(yùn)行狀況、溫度、濕度、清潔狀態(tài)(沉降菌數(shù)、浮游菌數(shù)、塵埃粒子數(shù))、修理原因、修理結(jié)果、清潔工作(桌面、地板、墻面、天花板、傳遞窗、門把手)、消毒液名稱等。

3.建立使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范(SOP)

(2)物品進(jìn)入潔凈室(無菌室)的基本要求:進(jìn)入潔凈室(無菌室)的物品必須在第一緩沖室內(nèi)用消毒劑消毒外部表面，在物流緩沖室、傳送窗戶1小時以上，無菌空氣干燥后送入無菌室。注意不要帶纖維、容易灰塵的東西去凈化實驗室。無菌室內(nèi)固定物品不得隨意搬出。

(3)人員進(jìn)入潔凈室(無菌室)要求:實驗人員進(jìn)入潔凈室(無菌室)不得化妝、手表、戒指等飾品，不得吃、嚼口香糖。清潔手后，進(jìn)入第一緩沖室更衣，同時更換消毒隔離拖鞋，脫下外套，用消毒液消毒手套，更換無菌連衣帽(不得暴露在外面)，戴無菌口罩。然后，更換或戴上第二個無菌手套，進(jìn)入第二個緩沖間時更換第二個消毒隔離拖鞋。通過淋浴室30s淋浴進(jìn)入無菌室。

(4)溫濕度觀察要求:觀察溫度計、濕度計顯示的溫濕度在規(guī)定范圍內(nèi)，作為實驗原始數(shù)據(jù)記錄在案件中。如果發(fā)現(xiàn)問題，應(yīng)及時找出原因，及時報告實驗室主管，并記錄報告原因和結(jié)果。

(5)沉降菌落計數(shù)和浮游菌測定要求:在每次實驗的同時，在操作室和層流臺上進(jìn)行微生物沉降菌落計數(shù)，將結(jié)果記錄在使用登記本上，作為實驗環(huán)境的原始數(shù)據(jù)記錄在實驗報告書上。每周一次或無菌檢測等必要時，每次實驗同時對操作室和凈化臺進(jìn)行浮游菌測量，將結(jié)果記錄在使用登記本上，作為實驗環(huán)境的原始數(shù)據(jù)記錄在實驗報告上。

(6)消毒要求:無菌室每周和每次操作前使用0.1%的新潔爾消毒或2%的甲酚液或其他適當(dāng)?shù)南疽?常用消毒劑的品種為5-20倍稀釋的碘伏水溶液、0.1%的新潔爾消毒液、1:50的84消毒液、75%的羥基醇溶液、3%的碘酒溶液、5%的石炭酸(來蘇兒)消毒溶液、2%的二面水溶液、尼泊金乙醇消毒液(處方:對基苯甲酸甲酯21.5g的清潔消毒程序應(yīng)從內(nèi)向外，從高潔凈區(qū)到低潔凈區(qū)。逐漸向外退出清潔區(qū)域。然后打開無菌空氣過濾器和紫外線燈殺菌1-2h，殺死微生物。每次操作結(jié)束，同樣用上述消毒溶液擦拭桌面，去除室內(nèi)濕氣，用紫外線燈殺菌30min。無菌室是怎樣管理的

(7)其他要求:停電時，立即停止實驗，離開無菌室。關(guān)閉所有的電門。在重新進(jìn)入無菌室之前，至少打開機(jī)械室運(yùn)行1小時以上。

4.潔凈度檢測的要求和方法

無菌室消毒處理后，無菌試驗前和操作中必須檢查空氣中的落數(shù)，判斷無菌室是否達(dá)到規(guī)定的清潔度

(1)沉降菌檢測方法和標(biāo)準(zhǔn):無菌方式將3個營養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區(qū)的桌面左、中、右各放置1個平板蓋，在空氣中暴露30min后，將平板蓋在32.5℃

(2)浮游菌檢測方法和標(biāo)準(zhǔn):使用專用采樣器，采用沖擊法機(jī)制的采樣器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，配備流量計和定時器，嚴(yán)格按照儀器說明書的要求進(jìn)行操作和定時校正，采樣器和培養(yǎng)器進(jìn)入測量室前消毒室消毒劑滅菌，使用的培養(yǎng)基礎(chǔ)是營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基礎(chǔ)和藥典認(rèn)可的其他培養(yǎng)基礎(chǔ)。使用時，首先啟動真空泵抽氣，時間在5分鐘以上，調(diào)節(jié)流量、轉(zhuǎn)盤、轉(zhuǎn)速。關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)盤，蓋上取樣罩，調(diào)節(jié)間隙高度。放置采樣口采樣點后，依次打開采樣器、真空泵，旋轉(zhuǎn)定時器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)盤放置32.5℃士2.5培養(yǎng)48h，取出檢查，浮菌落數(shù)平均不得超過5個/m3。

每批培養(yǎng)基應(yīng)選擇3個培養(yǎng)盤進(jìn)行比較培養(yǎng)。無菌操作臺或超凈工作臺應(yīng)定期檢測懸浮顆粒，達(dá)到100級(一般用塵粒計數(shù)器)檢測，根據(jù)無菌情況必要更換過濾器。

5.定期進(jìn)行清潔度再驗證

定期(每季度、半年、一年)或清潔室設(shè)施發(fā)生重大變化時，按國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16292-16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)清潔室(區(qū))懸浮粒子、懸浮菌和沉降的測試方法》進(jìn)行清潔度再驗證，確保清潔度符合規(guī)定

定期對潔凈室的環(huán)境檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行趨勢分析和評價，根據(jù)評價結(jié)果，了解潔凈室設(shè)施環(huán)境質(zhì)量的穩(wěn)定狀況和變化趨勢，決定是否需要修改相應(yīng)的警戒和糾偏限度。

6.定期更換新的紫外線燈
更換凈化系統(tǒng)的初效、中效、高效的頭定期更換新的紫外線燈，確保紫外線燈的滅菌持續(xù)有效。同時在使用登記本上創(chuàng)建更換記錄，定期存檔保存。

至少2年1次，或者根據(jù)清潔度驗證實際情況，定期更換初效、中效、高效的頭部。確保凈化系統(tǒng)的功能持續(xù)有效，同時在使用注冊簿時制作交換記錄，定期存檔保存。

7.在使用過程中應(yīng)盡量減少人員的行走或活動

平時實驗室內(nèi)應(yīng)盡量減少人員的行走或活動，同向潔凈室的門應(yīng)關(guān)閉或安裝自動關(guān)閉門。

8.如果清潔度不符合規(guī)定，立即停止使用

如果發(fā)現(xiàn)清潔度不符合規(guī)定，立即停止使用，尋找原因，完全清潔，必須在清潔度檢驗符合規(guī)定后再使用

9.對進(jìn)入的外來人員或維護(hù)人員進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督

非微生物室檢查人員不得進(jìn)入潔凈室(無菌室)，對必須進(jìn)入的外來人員或維護(hù)人員進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督。

10.潔凈室無菌室日常管理

建立安全衛(wèi)生值日制度，發(fā)現(xiàn)換氣系統(tǒng)、墻壁、天花板、地板、門窗、公共介質(zhì)系統(tǒng)等設(shè)施有損壞，應(yīng)立即報告并采取相應(yīng)的修復(fù)措施，保存記錄并立即歸檔。

從潔凈室(無菌室)環(huán)境中檢測到的微生物可以鑒別到屬或種類，保留鑒別實驗的原始記錄和菌種，作為無菌生產(chǎn)、無菌檢測潔凈室環(huán)境質(zhì)量、消毒劑有效評價和污染源調(diào)查的依據(jù)，也為無菌檢測陽性的調(diào)查提供了第一手資料。
 

武漢得創(chuàng)實驗室工程有限公司