【前言】 微生物檢測(cè)工作人員每天都必須在無(wú)菌室工作中，在超凈臺(tái)或是生物安全柜里實(shí)際操作，為了更好地確保大家檢驗(yàn)的精確性，大家務(wù)必規(guī)定無(wú)菌室及其操作臺(tái)符合規(guī)定，那大家應(yīng)當(dāng)如何開展認(rèn)證呢？下邊大家介紹一下自然環(huán)境中無(wú)菌檢測(cè)或除菌實(shí)際效果應(yīng)如何檢查。  

微生物檢測(cè)工作人員每天都必須在無(wú)菌室工作中，在超凈臺(tái)或是生物安全柜里實(shí)際操作，為了更好地確保大家檢驗(yàn)的精確性，大家務(wù)必規(guī)定無(wú)菌室及其操作臺(tái)符合規(guī)定，那大家應(yīng)當(dāng)如何開展認(rèn)證呢？下邊大家介紹一下自然環(huán)境中無(wú)菌檢測(cè)或除菌實(shí)際效果應(yīng)如何檢查。

一、紫外線殺菌燈除菌實(shí)際效果查驗(yàn)

紫外線殺菌燈在應(yīng)用全過(guò)程中輻照度會(huì)慢慢減少，危害其除菌實(shí)際效果，故應(yīng)當(dāng)定期維護(hù)。紫外線殺菌燈的除菌合理光波長(zhǎng)是253.7nm，其抗壓強(qiáng)度可以用管理中心光波長(zhǎng)254nm的紫外線強(qiáng)度計(jì)測(cè)量。在沒(méi)有紫外線強(qiáng)度計(jì)的狀況下能夠 選用分子生物學(xué)取代。

分子生物學(xué)檢測(cè)簡(jiǎn)略流程以下：采用枯草枯草芽孢菌ATCC 9372，做成10⁶CFU/mL~10⁸CFU/mL濃度值的菌懸浮液；采用經(jīng)脫油解決的0.5厘米×1.0cm尺寸的絲布或鋁塊，高壓滅菌后作為媒介；每一個(gè)媒介上滴一滴制取好的菌懸浮液，干躁儲(chǔ)備用；將八個(gè)染菌媒介放于無(wú)菌檢測(cè)容器中，放置紫外線殺菌燈下1米~1.5m處，打開紫外線殺菌燈直射，于0.5h、1h、1.5h和1h各取下兩個(gè)染菌媒介，各自資金投入盛滿5mL緩存蛋白胨水的過(guò)柱液；系列產(chǎn)品稀釋液后開展平板電腦記數(shù)；同法取八個(gè)染菌媒介用作陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)際操作除不經(jīng)過(guò)紫外線此昂直射外與實(shí)驗(yàn)組同樣。

消滅率=（陽(yáng)性對(duì)照收購(gòu) 菌數(shù)-實(shí)驗(yàn)組收購(gòu) 菌數(shù)）/陽(yáng)性對(duì)照收購(gòu) 菌數(shù)×100%

消滅率超過(guò)99.9%時(shí)，覺(jué)得紫外線殺菌燈除菌實(shí)際效果達(dá)標(biāo)。

二、無(wú)菌室空氣指數(shù)查驗(yàn)

無(wú)菌室空氣指數(shù)查驗(yàn)應(yīng)依照取樣方案，依據(jù)狀況對(duì)處在空態(tài)、靜態(tài)數(shù)據(jù)和一切正常運(yùn)作的風(fēng)險(xiǎn)性區(qū)，應(yīng)用適度的儀器設(shè)備收集空氣中微生物菌種，測(cè)量并監(jiān)管風(fēng)險(xiǎn)性區(qū)氣體的微生物菌種環(huán)境污染。氣體飄浮微生物菌種的取樣和記數(shù)方式各種各樣，依據(jù)多需取樣目地決策實(shí)際的取樣方式和采樣器。因采樣器的收集高效率不一樣，應(yīng)謹(jǐn)慎挑選適合的方式和機(jī)器設(shè)備。采樣器分成兩大類：主動(dòng)式采樣器，如落菌盤；主動(dòng)型采樣器，如過(guò)慮采樣器、碰撞采樣器、沖擊性采樣器等。

1.地基沉降法

落菌盤等主動(dòng)式氣體微生物菌種采樣器不可以精確測(cè)量空氣中的微生物菌種的數(shù)量，只是精確測(cè)量空氣中微生物菌種在表層的地基沉降率。只需明確單位時(shí)間落菌盤里微生物菌種的總數(shù)，再依據(jù)落菌盤的曝露總面積與曝露時(shí)間之間的關(guān)聯(lián)，就可以大概測(cè)算出空氣中微生物菌種的總數(shù)。

總面積低于30m²的房間內(nèi)設(shè)一條直線取6點(diǎn)，在其管理中心及其兩邊離墻1米處各取1點(diǎn)；總面積超過(guò)30m²的房間內(nèi)屋子四面離墻1米和中間各置放一個(gè)平皿，高寬比為試驗(yàn)臺(tái)高寬比。培養(yǎng)液平皿打開表蓋曝露10min，隨后蓋緊外蓋反放，塑造48h，記數(shù)每一個(gè)平皿上的菌體數(shù)。

日常監(jiān)管時(shí)，能夠 設(shè)置可接納的菌體數(shù)限制值。一般無(wú)菌室全部的抽樣平皿上的病菌數(shù)量應(yīng)低于15個(gè)。空氣指數(shù)優(yōu)良的無(wú)菌室，一般么個(gè)平皿上生長(zhǎng)發(fā)育的病菌不超過(guò)兩個(gè)。

2.空氣凈化法：

氣體取樣除開當(dāng)然地基沉降法外，還能夠應(yīng)用專業(yè)的主動(dòng)型采樣器。主動(dòng)型采樣器能夠 評(píng)定風(fēng)險(xiǎn)性區(qū)氣體微生物菌種的特點(diǎn)。主動(dòng)型采樣器關(guān)鍵包含過(guò)慮采樣器、碰撞采樣器、沖擊性采樣器等。

碰撞采樣器能夠 分成間隙式采樣器、離心式風(fēng)機(jī)采樣器和針眼式采樣器。間隙式采樣器由額外的真空泵抽氣泵抽真空，根據(jù)采樣器的間隙式平板電腦，將收集的氣體噴涌并撞到遲緩轉(zhuǎn)動(dòng)的平板電腦培養(yǎng)液表層上，粘附的活微生物菌種顆粒歷經(jīng)塑造后產(chǎn)生菌體，給予記數(shù)。離心式風(fēng)機(jī)采樣器因?yàn)閮?nèi)部離心風(fēng)機(jī)的高速運(yùn)轉(zhuǎn)，氣旋從采樣器前側(cè)吸進(jìn)從后側(cè)排出，在離心脫水機(jī)的功效下，空氣中的活微生物菌種顆粒有充足的時(shí)間撞到專用型的固形塑造條上，經(jīng)塑造后產(chǎn)生菌體，給予記數(shù)。

過(guò)慮式空氣采樣器是最常見(jiàn)、非常簡(jiǎn)單的空氣采樣器。過(guò)慮式采樣器有取樣頭、過(guò)濾裝置、蒸汽流量計(jì)和抽氣泵構(gòu)成。過(guò)慮式采樣器的構(gòu)造如圖所示：

啟動(dòng)電動(dòng)機(jī)后，抽氣泵工作中，推動(dòng)氣體吸進(jìn)取樣頭，氣體通過(guò)濾裝置的情況下，超過(guò)濾膜孔徑的顆粒物被阻留，當(dāng)做到事先設(shè)置呼吸容積后抽氣泵停止工作，將濾紙取下轉(zhuǎn)載到培養(yǎng)液上，塑造后測(cè)算空氣中微生物菌種的濃度值。過(guò)慮式采樣器捕捉高效率，可是濾紙?jiān)牧虾苡锌赡芪：ξ⑸锞N的成活率，也有取樣摩擦阻力大、總流量易失的缺點(diǎn)。

在沒(méi)有空氣采樣器的狀況下，能夠 自身拼裝如下圖的氣體錯(cuò)率取樣設(shè)備，留意拼裝相接處務(wù)必密不通風(fēng)。

開啟圖廣州中山大學(xué)瓶的水龍頭，氣體就被抽入無(wú)菌檢測(cè)水里。待4L流水完，就會(huì)有4L氣體根據(jù)瓶子中的無(wú)菌水，也就是4L空氣中的微生物菌種被存留在五十米L無(wú)菌檢測(cè)水里。無(wú)菌檢測(cè)汲取1米L過(guò)慮的水質(zhì)采樣開展平板電腦記數(shù)，做兩個(gè)平行面。37℃塑造48h記數(shù)。

每升空氣中的病菌數(shù)為：兩個(gè)平皿上病菌總數(shù)的均值×50/4。

三、無(wú)菌室物件表層微生物菌種環(huán)境污染查驗(yàn)

表層微生物實(shí)驗(yàn)室菌種環(huán)境污染的查驗(yàn)必須應(yīng)用交流接觸器或拭子，得到某表層某時(shí)間點(diǎn)的微生物菌種總數(shù)。

交流接觸器以器皿內(nèi)已經(jīng)知道總面積的固體塑造物質(zhì)與表層觸碰，觸碰總面積應(yīng)超過(guò)二十厘米²，勻稱用勁將全部營(yíng)養(yǎng)成分物質(zhì)壓著表層幾秒，不可挪動(dòng)。隨后將設(shè)備放回器皿內(nèi)，再清理取樣表層，消除殘余營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。交流接觸器塑造后呈現(xiàn)的菌體能夠 得出原表層微生物菌種的生存情況的鏡像系統(tǒng)“圖”。

應(yīng)用拭子更加簡(jiǎn)易和靈便，用拭子擦洗某一表層，它抹除的微生物菌種總數(shù)就可以測(cè)算出了。對(duì)觸碰設(shè)備碰觸不上的、高低不平或有凹痕的非速即大表層，用拭子取樣尤其便捷。棉拭子的操作步驟以下：

提前準(zhǔn)備原材料：自做無(wú)菌檢測(cè)棉拭子或選購(gòu)商業(yè)化的無(wú)菌檢測(cè)棉拭子、內(nèi)徑10厘米×10厘米無(wú)菌檢測(cè)規(guī)格型號(hào)板、無(wú)菌檢測(cè)鹽水、培養(yǎng)液平皿。

假如抽樣物件是平面圖的，將無(wú)菌檢測(cè)規(guī)格型號(hào)板放到物件表層，用淋濕的無(wú)菌檢測(cè)棉拭子在無(wú)菌檢測(cè)規(guī)格型號(hào)板中空處橫縱擦抹勻稱，擦抹時(shí)隨著旋轉(zhuǎn)棉拭子，剪去棉拭子與手觸碰一部分，將棉拭子放進(jìn)配有一定容積的無(wú)菌檢測(cè)鹽水中待檢。

將取樣管敲擊80次之上是棉拭子上的病菌充足蔓延，做適度稀釋液，開展平板電腦記數(shù)，37℃塑造48h記數(shù)。

病菌數(shù)量（CFU/cm²）=（平皿上菌體平均值×稀釋倍數(shù)）/取樣總面積（cm²）

四、工作人員表面無(wú)菌檢測(cè)查驗(yàn)

工作人員與檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)的表面主要是受。

被檢工作人員洗手后，五指閉攏。將泡浸過(guò)的棉拭子沿兩手指妥協(xié)指根到指端來(lái)回涂擦2次，涂擦的另外旋轉(zhuǎn)棉拭子。剪去作業(yè)者手觸碰位置，將棉拭子放進(jìn)配有一定容積的無(wú)菌室鹽水中待檢。

按“無(wú)菌室物件表層真菌感染查驗(yàn)”的方式開展試品解決、打疫苗、塑造、記數(shù)和匯報(bào)結(jié)果。