我院PCR實(shí)驗(yàn)室順利建成并投入使用

如何建立標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室？PCR實(shí)驗(yàn)室如何設(shè)計(jì)計(jì)劃是專業(yè)的？PCR實(shí)驗(yàn)室管理有什么注意事項(xiàng)？本文從0開始理解PCR實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃設(shè)計(jì)。

一、PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)

標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室分為4個(gè)區(qū)域，分別為

n1.試劑配制區(qū)域

n2.樣品處理區(qū)域；

n3.核酸擴(kuò)張區(qū)域

產(chǎn)物分析區(qū)域

核酸擴(kuò)張區(qū)域

(進(jìn)入各工作區(qū)必須嚴(yán)格按單向進(jìn)行，不同工作區(qū)使用不同的工作服，如顏色。工作人員離開各工作區(qū)時(shí)，不得帶出工作服)

二、PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局

試劑準(zhǔn)備區(qū):擴(kuò)大試劑的配置、分裝和保存

樣品處理區(qū):樣品注冊(cè)、分裝核酸提取、保存和樣品

擴(kuò)大產(chǎn)物分析區(qū):擴(kuò)大產(chǎn)物的測(cè)定、結(jié)果分析、注冊(cè)和報(bào)告

擴(kuò)張前區(qū)和擴(kuò)張后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開，使用不同的房間，兩區(qū)之間最好有一定的間隔

使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)行少量試劑配制

在滿足以下操作和清潔處理要求的前提下，樣品處理區(qū)域的準(zhǔn)備區(qū)域可以設(shè)置在同一個(gè)房間內(nèi):

在生物安全柜內(nèi)操作的

每個(gè)實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)組分別使用各自的試劑和消耗品#

放置污染材料的器密封并一次性使用。

pcr實(shí)驗(yàn)室建設(shè)計(jì)劃要點(diǎn)

將PCR過程分為試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本準(zhǔn)備和PCR擴(kuò)展檢查三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)。整個(gè)區(qū)域都有整體緩沖走廊。各獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)有緩沖區(qū)，同時(shí)各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，在PCR實(shí)驗(yàn)中試劑和標(biāo)本不受氣溶膠污染，減少擴(kuò)大產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染

可開緩沖區(qū)I，緩沖區(qū)ii和PCR擴(kuò)大區(qū)的排氣扇向外排氣，實(shí)驗(yàn)區(qū)的外墻和各門都設(shè)置了風(fēng)量可調(diào)的回氣口，空氣通過回氣口向室內(nèi)通風(fēng)

在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)和三個(gè)緩沖區(qū)的上部和傳輸窗內(nèi)部設(shè)置紫外線燈，供消毒

在試劑備考區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)，還設(shè)置了移動(dòng)紫外線燈，對(duì)實(shí)驗(yàn)桌進(jìn)行局部消毒

試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖不銹鋼(不推薦電子連鎖方式)傳輸窗口，保證試劑和標(biāo)本在傳輸過程中不受污染(人物分流)

照明器具選擇凈化照明器具，具有清洗方便、不積塵的特點(diǎn)。

PCR實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)這個(gè)小細(xì)節(jié)不能忽視！

三、設(shè)計(jì)要點(diǎn)

PCR實(shí)驗(yàn)室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組PCR實(shí)驗(yàn)，通常經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)張和產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程，如果需要實(shí)驗(yàn)過程，還需要增加樣品粉碎過程。

所謂分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室，是指完成上述實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)室相距甚遠(yuǎn)，呈分散布置形式。對(duì)于這種布局形式的PCR實(shí)驗(yàn)室，每個(gè)實(shí)驗(yàn)之間都不容易相互干擾，所以不需要特殊的條件要求。

所謂組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室是指完成PCR四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)室相鄰配置，構(gòu)成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)域的形式。組合形式的PCR實(shí)驗(yàn)室，由于各實(shí)驗(yàn)之間的集中配置容易引起相互干擾，因此對(duì)整體配置和屏障系統(tǒng)有一定的要求。各室在入口處設(shè)置緩沖間，減少室內(nèi)外空氣交換。

試劑調(diào)配室和樣品處理室應(yīng)微正壓，防止外部含有核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染的

核酸擴(kuò)張室和產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓，防止含有核酸的氣溶膠擴(kuò)張污染試劑和樣品，控制排氣量比吸氣量大，達(dá)到負(fù)壓效果。

理想的情況下，PCR實(shí)驗(yàn)室緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。PCR實(shí)驗(yàn)室的吸氣由原來的中央空調(diào)控制，要求將中央空調(diào)的吸氣口設(shè)置在指定點(diǎn)，高度鋪在地板上后2600mm。

使用熒光PCR儀，擴(kuò)展室和產(chǎn)物分析室可合并。

如果房間深入允許，可以設(shè)置PCR內(nèi)部的專用走廊。需要指出的是，在減少室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。

各地區(qū)之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)流程、物流、人流和氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)過程造成的污染產(chǎn)生假性結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)室的墻壁，包括天花板在內(nèi)，結(jié)構(gòu)牢固，氣密性好，所有陰角都應(yīng)采用圓弧線過渡的墻壁內(nèi)壁清潔，不吸附，耐腐蝕，容易清洗消毒的地板材料

儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺(tái)、打樣機(jī)、混勻機(jī)、天平和離心機(jī)等，打樣機(jī)、天平除專用外，還應(yīng)定期校準(zhǔn)。試劑分裝應(yīng)在超凈臺(tái)進(jìn)行，擴(kuò)大反應(yīng)混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級(jí)，試劑制作后應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢查。一個(gè)是否有污染，二個(gè)是檢查試劑的擴(kuò)大效果。

儀器設(shè)備主要包括生物安全柜、加樣器、離心機(jī)、溫育器、混合器等

擴(kuò)展區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)展器、超凈臺(tái)、微量增加器、可動(dòng)紫外燈。擴(kuò)展器需要校準(zhǔn)。配備UPS電源，防止電壓變動(dòng)，停電影響擴(kuò)大效果。

本區(qū)使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、樣品器和水浴箱等潔凈實(shí)驗(yàn)區(qū)的緩沖間面積不得超過主實(shí)驗(yàn)室的八分之一。

四、一些瑣碎、不可忽視的設(shè)計(jì)

PCR實(shí)驗(yàn)室沒有嚴(yán)格的凈化要求，但為了避免各實(shí)驗(yàn)區(qū)間的交叉污染，應(yīng)采用全排氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格控制輸送、排氣的比例，保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問題是如何避免污染。在實(shí)際工作中，常見的有擴(kuò)大產(chǎn)物污染的天然基因組DNA污染的試劑污染和標(biāo)本之間的污染。一旦發(fā)生污染，實(shí)驗(yàn)必須停止，直到找到污染源，實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須無效，必須重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。因此，污染發(fā)生后，圍繞實(shí)驗(yàn)室尋找污染源不僅花費(fèi)時(shí)間，而且麻煩，浪費(fèi)人力物資。為了避免污染，必須首先預(yù)防，而不是排除。

(1)嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的人員不得擅自進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室。有條件時(shí)，必須設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的門。

(2)盡量減少實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的行走，減少交叉污染的可能性。

(3)擴(kuò)大產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴(kuò)大產(chǎn)物污染源，廢液不能倒入實(shí)驗(yàn)室，必須用消毒液浸泡消毒后，在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方放棄，使用的吸引器等一次性材料也必須用消毒液浸泡消毒后進(jìn)行統(tǒng)一處理，如焚燒等3.5完善的實(shí)驗(yàn)室輔助設(shè)施，完善的實(shí)驗(yàn)室輔助設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)作業(yè)的必要條件，必須根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器。