一、無菌操作原則規定

1. 打疫苗病菌時務必穿工作服裝、戴工帽。     

2. 開展打疫苗食品類試品時，務必穿專用型的工作服裝、帽及涼拖，應放到無菌車間緩沖間， 工作中前經紫外線殺菌后應用。      

3. 打疫苗食品類試品時，應在進無菌車間前要肥皂洗手，隨后用75％酒精棉球將手擦干凈。     

4. 開展打疫苗常用的塑料吸管，平皿及培養液等務必經消毒滅菌，開啟包裝未應用完的容器，不可以置放后再應用，金屬材料用品應高壓滅菌或用95%酒精點燃灼燒三次后應用。       

5從包裝中取下塑料吸管時，塑料吸管尖部不可以碰觸露出位置，應用塑料吸管打疫苗于試管嬰兒或平皿時，塑料吸管尖不可碰觸試管嬰兒或平皿邊。      

6.打疫苗試品、轉種病菌務必在酒精噴燈前實際操作，打疫苗病菌或試品時，塑料吸管從包裝中取下后及開啟試管嬰兒塞都需要根據火苗消毒殺菌。      

7.接種環和針在打疫苗病菌前要經火苗灼燒所有鐵絲，必需時也要燒到環和針與桿的相接處，打疫苗結核桿菌和最烈菌的接種環應在開水中燒開5min，再經火苗灼燒。

8. 塑料吸管汲取菌液或試品時，運用相對應的橡皮頭汲取，不可立即用口吸。
       二、無菌檢測間應用規定

1、無菌檢測間通往外邊的窗子應是雙層中空玻璃，并要密封性，不可隨便開啟，并設立與無菌檢測間尺寸相對應的緩沖間及移門，另設立0.5-0.7平米的小窗，以便進到無菌檢測間后傳送物件。

2、無菌檢測間內要保持干凈，工作中完用2%-3%煤酚皂水溶液消毒殺菌，擦洗工作中櫥柜臺面，不可儲放與實驗不相干的物件。      

3、無菌檢測間應用前后左右應把門關嚴， 開啟紫外線殺菌燈，如選用房間內懸吊訓練紫外燈消毒時，需30W紫外線殺菌燈，間距在1.0M處，直射時間不少于30min，應用紫外線殺菌燈，應留意不可立即在紫外光下實際操作，以防造成損害，led燈管每過兩個星期要用酒精棉球輕輕地擦洗，去除上邊塵土和油污，以降低紫外光透過的危害。      

4、解決和打疫苗食品類標本采集時，進到無菌檢測間實際操作，不可隨便進出，如必須傳送物件，可根據小窗傳送。      

5、在無菌檢測間內如必須裝空調時，則應該有過濾系統。

三、消毒滅菌規定
微生物檢驗用的玻璃容器、金屬材料用品及培養液、被環境污染和打疫苗的塑造物等，務必經殺菌后才能應用。殺菌方法有空氣干燥和寒濕髙壓蒸汽鍋滅菌方法和間歇性滅菌方法
1、殺菌前提前準備

（1）全部必須殺菌的物件最先應清理晾曬，玻璃容器如塑料吸管、平皿用包裝紙盒嚴實，如用金屬材料筒應將上邊通氣口開啟。

（2）裝培養液的三角瓶蓋，用紙包裝好，試管嬰兒蓋好蓋，注射針須將芯管抽出來，用沙布包好。 

2、裝放

（1）干熱滅菌器：裝放物件不能過擠，且不可以觸碰箱的四壁。

（2）大中型髙壓蒸汽鍋：：置放殺菌物件各自捆扎好，立即放進消毒殺菌筒內，物件中間不可以 過擠。

3、機器設備查驗

（1）查驗門的電源開關是不是靈便，橡膠圈有沒有毀壞，是不是整平。

（2）查驗氣壓表蒸汽排盡時是不是滯留在零位，關好門和蓋，通蒸汽或加溫后，觀查是式壓力鍋或立柱式工作壓力蒸汽蒸汽滅菌器的應用應按以下流程開展：

①手提壓力鍋在行為主體內添加3L冷水，立柱式壓力鍋放水16L（多次重復使用時要將水 量補充，使水變渾濁需拆換）.

②手提壓力煲將機蓋上的排汽管插進消毒殺菌桶內腔的方鋼管中（無塑料軟管或塑料軟管生銹裂開的蒸汽滅菌器不可應用）。

③蓋好機蓋扭緊，勿使漏汽；置蒸汽滅菌器于明火上加溫，立柱式壓力煲通上開關電源，并開啟機蓋上的自動排氣閥放了冷氣機（水沸騰后排氣管10-15min）。

④關掉自動排氣閥，使蒸汽壓升高到要求規定，并保持要求時間（按殺菌物件特性與相關狀況而定）。

⑤做到要求時間后，對需干躁的物件，立即打開自動排氣閥排出來蒸汽，待工作壓力修復到零時，當然制冷至 60℃后打開表蓋取放，若為液態物件，不必開啟自動排氣閥，而應該馬上將鍋除去熱原，待當然制冷，工作壓力修復至零，溫度降至60℃下列再打開表蓋取放，防止忽然緩解壓力液態強烈燒開或器皿工程爆破。   

（3）立式壓力煲蒸汽蒸汽滅菌器的應用按以下流程開展：

①關嚴鍋門，開啟旁通閥，將蒸汽引進隔層開展加熱，隔層內強冷空氣經阻氣器全自動排出來。

② 隔層做到預訂溫度后，開啟鍋室旁通閥，將蒸汽引進鍋室，鍋房間內強冷空氣經鍋室阻氣器全自動排出來。

③待鍋室做到要求的工作壓力與溫度時，調整旁通閥，使維持穩定。

④當然或人力減溫至60℃再開關門取放，不可應用迅速排出來蒸汽法，防止忽然降血壓，液態強烈燒開或器皿工程爆破。

⑤應用全自動系統控制式工作壓力蒸汽蒸汽滅菌器，在擺好物件關嚴門后，應依據物件類型按 動相對應電源開關，便于按要求程序流程全自動開展殺菌，殺菌時務必運用附屬儀表盤紀錄溫度與時間以備查簿，實際操作規定應嚴苛依照生產廠家使用說明開展。

四、殺菌后處理工藝

殺菌后物件，按一切正常狀況已屬無菌檢測，從蒸汽滅菌器中取下應認真仔細置放，以防再一次環境污染。    

1.物件取下，隨后查驗包裝的一致性，若有毀壞或棉塞脫下，不能做為無菌檢測物件應用。   

2.取下的物件，若為包裝有顯著的浸水者，不能做為無菌檢測物件應用。

3.培養液或實驗試劑等，應查驗是不是合乎做到殺菌后的顏色或情況，未做到者應廢料。

4.開閉式器皿，在取下時要將圓孔篩關掉。

5.取下的物件墜落在地或誤放不干凈的這個，或粘有水濕，均視作遭受環境污染，不能做為無菌檢測物件應用。

6.取下的達標殺菌物件，應儲放于儲物間或防污柜里，禁止與未殺菌物件混存。

7.凡屬達標物件，應標著殺菌日期及有效期。

8.每次殺菌解決進行后，紀錄殺菌產品名、總數、溫度、時間、作業者。

五、有害有菌廢棄物解決規定

微生物實驗常用實驗器材、塑造物等沒經消毒殺菌解決，一律不可帶出實驗室。

1、經塑造的環境污染原材料及廢料應放到嚴實的器皿或細鐵絲筐內，并集中化儲放在特定地址，待統一開展高壓滅菌。

2、經微生物環境污染的塑造物，務必經121℃30min高壓滅菌。

3、染菌后的塑料吸管，應用后放進5%煤酚皂水溶液或石炭酸液中，至少泡浸24小時（消毒殺菌液態不可小于泡浸的高寬比）再經121℃30 min高壓滅菌。

4、玻片上色清洗片的液態，一般可立即沖進下水管道，最烈菌的清洗液務必沖在量杯 中，經高壓滅菌后才可倒進下水管道，上色的裝片放進5%煤酚皂水溶液中泡浸24小時后，燒開清洗。做凝結實驗用的裝片或平皿，務必高壓滅菌后清洗。

5、粉碎的塑造物，馬上用5%煤酚皂水溶液或石炭酸液噴撒和泡浸被環境污染位置，泡浸三十分鐘后再擦洗整潔。

環境污染的工作服裝或開展最烈實驗所穿的工作服裝、帽、防護口罩等，應放進專用型消毒殺菌袋內，經高壓滅菌后才能清洗。

六、培養液制取規定

培養液制取的品質將立即危害微生物生長發育。由于各種各樣微生物對其營養成分規定不完全一致，塑造目地的不一樣，各種各樣培養液制取規定以下：

1、依據培養液秘方的成份按量稱量，隨后溶解純凈水中，在應用前對運用的實驗試劑藥物應開展產品質量檢驗。

2、PH 測量及調整：PH測量要在培養液冷至室內溫度時開展，因在熱或冷的狀況下，其PH有一定差別，當測量費力羅，按測算量添加堿或酸攪拌后，應再檢測一次。培養液 PH值一定要精確，不然會危害微生物的生長發育或危害結果的觀查。但特別注意因高壓滅菌可危害一些培養液的 PH 減少或上升，故不適合殺菌工作壓力過高或頻次過多，以防危害培養液的品質，顯色劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調過PH后再添加。

3、培養液需維持回應，以便觀查病菌的生長發育狀況，培養液加溫燒開后，可以用藥棉 花或絲絨布過慮，以去除沉淀，必需時可以用雞蛋回應解決，常用瓊脂條要事先清洗晾曬后應用，防止因瓊脂含殘渣而危害清晰度。

4、盛放培養液不適合用鐵、銅等器皿，應用清洗的中性化硬質的玻璃器皿為好。

5、培養液的殺菌既要做到徹底殺菌目地，又要留意不因加溫而減少其營養成分，一般121℃15min就可以，若為帶有不抗高燒化學物質的培養液如糖原、血清蛋白、果膠等，則應選用超低溫殺菌或間歇性法殺菌，一些不可以加溫的實驗試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌藥等，待基本瓊脂高壓滅菌后涼至50℃上下再添加。

6、每次培養液制取好后，應做無菌檢測生長發育實驗及所檢菌種生長發育實驗。如果是生物化學塑造 基，應用規范菌種打疫苗塑造，觀查生化反應結果，應呈一切正常反映，培養基不應貯存太久，必需時可置4℃電冰箱存放。

7、現階段各種各樣干躁培養基較多，每次要用規范菌種開展生長發育實驗或生化反應觀查，各種各樣培養基用相對應菌種生長發育實驗優良后才可運用，新購入的或存放太久的干躁培養基，在配置時也應測PH，應用時要依據產品手冊使用量和方式開展。

8、每次制取的培養基常用化學藥品、殺菌狀況及菌種生長發育實驗結果、制作人等應搞好紀錄，以便查看。