微生物實驗室的常用儀器設備及使用的注意事項

4月26日，國家衛生委員會召開全國視頻會議，明確提出所有縣區級以上疾病對策機構、二級以上綜合醫院應緊急改造，在短時間內形成核酸檢測能力。

各地公立機構的檢驗能力不能滿足需求只是暫時的，獨立醫學實驗室在充實檢驗能力的同時，發揮自己豐富的檢驗管理運營理念，以及地區化壟斷的經驗優勢，融入國家隊核酸檢驗能力的建設

隨著各地建立PCR實驗室，本文從硬件基礎的角度整理了PCR實驗室建設的幾個要點，獨立醫學實驗室運用豐富的運營經驗，建設指導

本平臺對接多家獨立醫學實驗室，提供不同ICL機構PCR實驗室建設的相關優勢，可以進行PCR實驗室建設的需求咨詢，歡迎后臺小編(微信號:yourivd))
 

如何建設PCR實驗室

以下是PCR實驗室建設過程中的幾個重要控制點，根據實驗室的具體情況制作質量系統，制作《質量手冊》、《程序文件》、《作業指導書》，保證管理系統的運行效果。

管理系統的特點是明確的目的、規范的管理、有效的制約、高效的機制、能夠自我發展的整體。

建立完善的SOP文件，規定完成各種質量活動的方法，各SOP應對一組相互關系的活動進行說明。

每個SOP文件都應該說明這個質量各個環節的輸入、轉換和輸出所需要的文件、物資、人員、記錄以及與相關活動的界面關系。

明確各環節轉換過程中各要素的要求，即誰做、什么、什么程序、達到什么要求、如何控制、形成什么記錄和報告以及相應的審查手續。

規定在質量活動中需要注意的例外或特殊情況的糾正措施。SOP應簡潔明了，易于理解，員工應熟練掌握和嚴格遵守。

02PCR實驗室關設置

完成一組PCR實驗，通常需要經過試劑配制、樣品處理、核酸擴張和產品分析四個實驗過程。

這四個實驗過程的實驗室應相鄰配置，構成獨立的PCR實驗區。標準的PCR實驗區包括試劑準備區、標本準備區、擴展區、產物分析區、各區輔助緩沖區和公共走廊。

pCR實驗室整體平面布局

某醫院PCR實驗室平面布局如圖1所示，整個區域都有公共走廊，每個獨立實驗區都有專門的緩沖區。通過壓差控制，在PCR實驗中試劑和標本不受氣溶膠污染，減少擴大產品對人員和環境的污染。

圖表1、某醫院PCR實驗室平面圖

試劑準備區

這個實驗區主要進行的操作是儲存試劑的制備、試劑的分裝和主反應合液的制備。

試劑和用于標本制作的材料應直接運輸到該區域，不得通過其他區域。試劑原材料必須儲存在本區，并在本區制備必要的儲存試劑。

試劑準備區配備2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計算冷負荷時，需要計算。

房間面積應控制在15m2~20m2。本區壓力梯度要求為：相對正壓狀態，防止外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染。

標本制備區

這個區域主要進行的操作是臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)的提取、保存、增加反應管和測定RNA時的cDNA的合成。

標本制備區配備2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計算冷負荷時需要計算。在標本制備區域，還需要配備生物安全柜來提取核酸。

微生物實驗室區分及要求

為了避免提取的核酸在柜內反復循環，造成標本之間的交叉污染，出現假陽性的結果，該區域配備的生物安全柜必須為B2型。生物安全柜工作區域的垂直氣流均來自實驗室，排氣經高效過濾器過濾后直接排到室外，不得返回安全柜和實驗室。

根據經驗，在實驗室內設置生物安全柜時，每臺設置一臺，實驗室面積增加10m2的標本制備區域的面積應在25m2~30m2之間。本區壓力梯度要求為：相對于鄰近區為正壓，避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。

擴展室

這個區域主要進行的操作是DNA或cDNA擴展。另外，制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑的貯藏和制備區)制備的反應混合液等也可以在本區內進行。

在巢式PCR測量中，通常在第一次擴張后必須打開反應管，因此巢式擴張具有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區內進行。

展室主要配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀，本文實例使用ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

在實驗室建設過程中，需要為PCR儀配備專用的UPS電源，保證其正常工作。該區域的面積控制在15m2~20m2。

本區的壓力梯度要求為:相對于相鄰區域為負壓，以免氣溶膠從本區泄漏。為了避免氣溶膠造成的污染，應盡量減少本區內不必要的行走。個別操作，如樣品，應在超凈臺內進行。建議采用5~10Pa壓差，在控制方面比較容易實現。

產物分析區域

該區域主要進行的操作是擴展片段的測定。如果使用全自動封閉分析儀器進行檢測，則該區域不設置。

在室內設置通風柜，保證室內相對負壓，空氣從室外流向室內。該區域面積控制在15m-20m。

本區域是最主要的擴展產品污染源，因此本區域的壓力梯度要求為:相對于鄰區域為負壓，避免擴展產品從本區域擴展到其他區域。建議采用5~10Pa壓差，在控制方面比較容易實現。

正負壓區緩沖室安裝

根據壓力梯度的要求，試劑配制室和樣品處理室相對正壓，擴展室和產物分析室相對負壓，要求正壓區和負壓區緩沖室的壓力設計大不相同。

正壓緩沖室符合一般正壓潔凈室的緩沖原則，主要是防止室外環境空氣中的氣溶膠進入室內。正壓緩沖室的布置如圖2所示。

正壓緩沖室布局圖

負壓緩沖室要求緩沖室對核酸擴展室和產物分析區保持正壓，緩沖室外也保持正壓(主要滿足室內凈化需求，如果室內沒有清潔要求，可以作為0壓)。負壓緩沖室的布置如圖3所示。